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金黄色葡萄球菌检验

作者:乐诊生物技术发布时间:2020-07-20 18:31浏览量:
  金黄色葡萄球菌检验
 
  1主题内容与适用范围
 
  本文规定了食品中金黄色葡萄球菌的检验方法。
 
  本文适用于航空食品的检验。
 
  2设备和材料
 
  吸管(1ml、10ml)、恒温培养箱(36±1℃)、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等
 
  3培养基和试剂
 
  普通肉汤培养基、胰蛋白胨大豆肉汤、Baird-Prker琼脂平板、缓冲蛋白胨水(BP)、凝固酶试验冻干血浆
 
  4检验程序(非选择性增菌法)
 
  金黄色葡萄球菌检验程序如下:
 
  检样25g+225mlBP胨水
 
  10ml匀液+10ml双料胰胨肉汤
 
  上述混合液+20ml20%NaCl单料胰胨肉汤
 
  36±1℃2h
 
  B-P平板
 
  36±1℃24h
 
  36±1℃48h
 
  挑可疑菌落,移种到肉汤培养基
 
  36±1℃24h
 
  观察溶血
 
  涂片染色
 
  凝固酶试验
 
  报告
 
  5操作步骤
 
  5.1称取25g固体样品;吸取25mL液体样品,加入225mLBP胨水,固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。
 
  5.2吸取10mL上述混悬液,接种于10mL双料胰蛋白胨大豆肉汤中,置36±1℃培养2h。
 
  5.3再加入20ml含20%NaCl的单料胰蛋白胨大豆肉汤,置36±1℃培养24±2h。
 
  5.4划线转种2个表面干燥的Baird-Parker琼脂平板上,36±1℃培养46±2h。
 
  5.5挑取可疑菌落移种到肉汤培养基中,置36±1℃温箱培养24h。
 
  5.6取肉汤培养物0.3ml同0.5ml凝固酶试验冻干血浆于8mm*100mm试管内充分混合,置36±1℃培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动为阳性。试验中需同时做已知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验。
 
  5.7本菌为革兰氏阳性球菌,排列是葡萄球状,无芽胞,无荚膜,致病性葡萄球菌菌体较小,直径约为0.5~1μm。在Baird-Parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2~3mm,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为一混浊带,在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度,偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落;但无混浊带及透明圈。
 
  5.8报告结果
 
  如发现有凝固酶试验阳性的菌落,即报告1g(ml)食品中有金黄色葡萄球菌存在,否则为阴性。
 
  注:本文参照SN0172-92《出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法》